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常達(dá)恩生物科技(上海)有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第2年

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elisa操作好能手都需要知道這些

時(shí)間:2024/1/25閱讀:1197
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       Elisa實(shí)驗(yàn)是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。


    咱們就來(lái)談?wù)凟LISA試劑盒需把握的關(guān)鍵有哪些技巧?


1.小心汲取試劑并嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)刻和溫度。請(qǐng)注意在汲取標(biāo)本/規(guī)范品,酶結(jié)合物或底物時(shí),第一個(gè)孔與最后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)刻距離假如太大,將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時(shí)刻,然后明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。

2.在儲(chǔ)存及孵育過(guò)程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。一切試劑瓶蓋須蓋緊以避免蒸發(fā)和污染,試劑避免受到微生物的污染,因?yàn)榈鞍姿饷傅母蓴_將導(dǎo)致呈現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。
3.濃洗滌液會(huì)有鹽分出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
4.試劑盒保存:部分試劑保存于-20℃,部分試劑保存于2-8℃,具體以標(biāo)簽上的標(biāo)示為準(zhǔn)。

5.剛敞開(kāi)的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì),此為正?,F(xiàn)象,不會(huì)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。

6.一切的樣品都應(yīng)管理好,依照規(guī)則的程序處理樣品和檢測(cè)設(shè)備。


我們可用于ELISA檢測(cè)的樣本是有多種類(lèi)型的,如血漿、血清、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等等,不同類(lèi)型的檢測(cè)樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測(cè)的正確性和準(zhǔn)確性的第一步,下面簡(jiǎn)單介紹一下細(xì)胞裂解液樣本及組織勻漿樣本的正確采集、處理方法。


細(xì)胞裂解液:

1.吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,用胰酶消化細(xì)胞,加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來(lái)。懸浮細(xì)胞可省略。
2.收集細(xì)胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預(yù)冷的PBS潤(rùn)洗3次。
3.加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞。通常6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸。
4.將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復(fù)凍融幾次,使細(xì)胞充分裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,以達(dá)到裂解的目的。
5.4℃10000×g 離心10min,除去細(xì)胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。


組織勻漿液:

1.將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗,洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。
2.將組織塊稱(chēng)重,記錄后剪碎,碎塊應(yīng)盡量小,便于勻漿得更充分。
3.將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿,勻漿時(shí)置于冰上或冰浴中。(通常按組織重量:PBS體積=1:9的比例勻漿,例如1g的組織樣本對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,檢測(cè)后計(jì)算樣品濃度時(shí)應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù))。
4.吸取勻漿液到離心管,4℃5000×g 離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
注意:保證樣本不含NaN3,因?yàn)镹aN3會(huì)抑制HRP的活性,從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。





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