本文要點(diǎn)：目前沒有專門針對(duì)猴痘的治療藥物，且疾病轉(zhuǎn)歸的監(jiān)測較為復(fù)雜，不能直觀評(píng)估病灶處的猴痘病毒載量，因此迫切需要開發(fā)猴痘的特異性藥物，以控制猴痘的持續(xù)流行。本研究中，首先合成了一種聚集誘導(dǎo)發(fā)光（AIE）材料TPE-BT-DPTQ，并封裝到聚乳酸－乙醇酸（PLGA）核心中，該核心同時(shí)具有近紅外區(qū)II熒光成像（NIR-II FLI）能力和光熱特性。隨后，將巨噬細(xì)胞的細(xì)胞膜覆蓋在核心上，形成一種多功能仿生納米粒子（TBD@M NPs）。此仿生納米粒子靜脈注射猴痘病變后，可以實(shí)現(xiàn)NIR-II熒光跟蹤以及光熱清除猴痘病毒。同時(shí)，由于該納米粒子聯(lián)合紅外光照射的治療方案可以有效地消除壞死組織和炎癥細(xì)胞，恢復(fù)受損的表皮，所以可以阻斷病毒向健康人傳播。最終可同時(shí)實(shí)現(xiàn)猴痘病毒的高效靶向治療和病灶中病毒傳播的阻斷。近紅外二區(qū)小動(dòng)物活體熒光成像系統(tǒng)

聚集發(fā)光光熱劑TPE-BT-DPTQ的合成步驟參考現(xiàn)有技術(shù)，具體合成路線如圖1所示。將PLGA聚合物(50:50)和TPE-BT-DPTQ分子溶解在四氫呋喃溶液中，將混合液快速注入PBS中，在通風(fēng)柜中攪拌6小時(shí)，去除四氫呋喃，得到PLGA核心懸浮液。接下來，通過低滲裂解、機(jī)械性裂解和密度梯度超速離心法提取巨噬細(xì)胞膜，然后利用共擠出的方法將巨噬細(xì)胞膜覆蓋在PLGA核心上，形成TBD@M NPs。

圖1.TPE-BT-DPTQ的合成途徑

圖2介紹了TPE-BT-DPTQ的NIR-II熒光特性和仿生納米粒子TBD@M NPs的性質(zhì)和特征。TPE-BT-DPTQ在四氫呋喃中的紫外-可見吸收峰≈821nm，光致發(fā)光光譜在1121nm處達(dá)到峰值（圖2C），熒光波長位于NIR-II區(qū)域（>1000 nm），這是針對(duì)猴痘病灶的NIR-II FLI的一個(gè)很有潛力的特征。

圖3介紹了TBD@M NPs的光熱特性和穩(wěn)定性。將TBD@M NPs懸液（1.0 mg mL-1蛋白濃度）用功率為0.4 W cm-2的808 nm激光持續(xù)照射5 min，然后將懸液自然冷卻至室溫。在此過程中，每30秒記錄一次懸浮液的溫度。根據(jù)相關(guān)公式計(jì)算出TBD@M NPs的光熱轉(zhuǎn)換效率(η)為39.3%（圖3A），遠(yuǎn)高于其他常用的商業(yè)光熱劑。TBD@M NPs（2.0 mg mL-1蛋白濃度）懸浮液在功率為0.4 W cm-2的808 nm激光照射下，7 min內(nèi)達(dá)到~70℃(圖3B），有助于猴痘病毒的光熱清除。

圖3.TBD@M NPs的光熱特性和穩(wěn)定性

圖4說明了體外實(shí)驗(yàn)中TBD@M NPs與痘苗病毒共定位，具有靶向作用。在808 nm激光照射下，相較于PBS組、PLGA核心組和TBD@RBC NPs組，TBD@M NPs組幾乎清除了痘苗病毒，且具有明顯的抗炎作用。

圖4.TBD@M NPs的體外病毒靶向性以及激光誘導(dǎo)的抗病毒和抗炎作用

圖5說明了將TBD@M NPs通過靜脈注射到已構(gòu)建的痘苗病毒引發(fā)的尾部劃痕小鼠模型（猴痘小鼠替代模型）體內(nèi)后，可以通過體外NIR-II FLI追蹤病灶，且TBD@M NPs組在感染病灶上表現(xiàn)出更高的熒光強(qiáng)度和更長的保留時(shí)間。808 nm激光照射感染病變處，TBD@M NP治療顯著促進(jìn)了結(jié)痂消融和傷口愈合，且病變組織病毒滴度顯著降低。說明TBD@M NPs既有近紅外二區(qū)成像功能，又能發(fā)揮對(duì)猴痘的光熱治療作用。

圖5.（A-B）TBD@M NPs治療后的NIR-II FLI和熒光強(qiáng)度分析；（C-I）TBD@M NPs在痘苗病毒引發(fā)的尾部劃痕小鼠模型中的傷口愈合作用。

圖6評(píng)估了TBD@M NPs的生物安全性。體外的CCK-8試驗(yàn)和體內(nèi)的血液生化指數(shù)試驗(yàn)、溶血實(shí)驗(yàn)、組織病理學(xué)評(píng)估都說明TBD@M NPs表現(xiàn)出非常強(qiáng)的生物相容性，具有良好的臨床轉(zhuǎn)化潛力。

圖6.TBD@M NPs的生物安全評(píng)估

在這項(xiàng)研究中，科研人員通過將AIE材料和基于細(xì)胞膜的仿生納米顆粒結(jié)合，采用共擠出的方法形成了TBD@M NPs，使其顯示出明顯的NIR-II發(fā)射特征，峰值位于1121nm。所以，該聚集發(fā)光光熱劑-類巨噬細(xì)胞多功能仿生納米粒子既可以實(shí)現(xiàn)猴痘病毒感染部位的光熱治療，又可以進(jìn)行靶向成像，進(jìn)而阻斷猴痘病毒的傳播，為猴痘病毒感染的治療和阻斷提供了新的思路。

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近紅外二區(qū)小動(dòng)物活體熒光成像系統(tǒng) - MARS

NIR-II in vivo imaging system

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