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激光掃描共聚焦顯微鏡可以應(yīng)用在哪些行業(yè)

閱讀:789      發(fā)布時間:2022-8-19
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  激光掃描共聚焦顯微鏡是激光、電子攝像和計算機圖像處理等現(xiàn)代高科技手段滲透,并與傳統(tǒng)的光學顯微鏡結(jié)合產(chǎn)生的先進的細胞分子生物學分析儀器。
  激光掃描共聚焦顯微鏡是普遍顯微鏡上的質(zhì)的飛躍,是電子顯微鏡的一個補充,現(xiàn)已廣泛用于熒光定量測量,共焦圖像分析,三維圖像重建等方面,在整個細胞生物學研究領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用前景。
  1. 定量熒光測量
  可進行重復(fù)性的低光探測及活細胞熒光定量分析。利用這一功能既可對單個細胞或細胞群的溶酶體,線粒體、DNA、RNA和受體分子含量、成份及分布進行定性及定量測定,還可測定諸如膜電位和配體結(jié)合等生化反應(yīng)程度。
  此外,還適用于高靈敏度快速的免疫熒光測定,這種定量可以準確監(jiān)測抗原表達,細胞結(jié)合和殺傷及定量的形態(tài)學特性,以揭示諸如腫瘤相關(guān)抗原表達的準確定位及定量信息。
  2. 定量共聚焦圖像分析
  借助于激光共焦系統(tǒng),可以獲得生物樣品高反差、高分辨率、高靈敏度的二維圖像??傻玫酵暾畹幕蚬潭ǖ募毎敖M織的系列及光切片,從而得到各層面的信息,三維重建后可以揭示亞細胞結(jié)構(gòu)的空間關(guān)系。
  能測定細胞光學切片的物理、生物化學特性的變化,如DNA含量、RNA含量、分子擴散、胞內(nèi)離子等,亦可以對這些動態(tài)變化進行準確的定性、定量、定時及定位分析。
  3. 三維重組分析生物結(jié)構(gòu)
  使用SFP進行三維圖像重組,SFP將各光學切片的數(shù)據(jù)組合成一個真實的三維圖像,并可從任意角度觀察,也可以借助改變照明角度來突出其特征,產(chǎn)生更生動逼真的三維效果。
  4. 動態(tài)熒光測定
  Ca2+、pH 及其它細胞內(nèi)離子測定,利用產(chǎn)品能迅速對樣品的點,線或二維圖像掃描,測量單次、多次單色、雙發(fā)射和三發(fā)射光比率,使用諸如Indo-1、BCECF 、Fluo-3等多種熒光探針對各種離子作定量分析。
  可以直接得到大分子的擴散速率,能定量測定細胞溶液中Ca2+對腫瘤啟動因子、生長因子及各種激素等刺激的反應(yīng),以及使用雙熒光探針Fluo-3和CNARF進行Ca2+和pH的同時測定。
  5. 熒光光漂白恢復(fù)(FRAP)——活細胞的動力學參數(shù)
  熒光光漂白恢復(fù)技術(shù)借助高強度脈沖式激光照射細胞某一區(qū)域,從而造成該區(qū)域熒光分子的光淬滅,該區(qū)域周圍的非淬滅熒光分子將以一定速率向受照區(qū)域擴散,可通過低強度激光掃描探測此擴散速率。通過儀器可直接測量分子擴散率、恢復(fù)速度,并由此而揭示細胞結(jié)構(gòu)及相關(guān)的機制。
  6. 胞間通訊研究
  動物細胞中由縫隙連接介導(dǎo)的胞間通訊被認為在細胞增殖和分化中起非常重要的作用??捎糜跍y定相鄰植物和動物細胞之間細胞間通訊,測量由細胞縫隙連接介導(dǎo)的分子轉(zhuǎn)移,研究腫瘤啟動因子和生長因子對縫隙連接介導(dǎo)的胞間通訊的抑制作用,以及胞內(nèi)Ca2+、PH和cAMP水平對縫隙連接的調(diào)節(jié)作用。

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