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一、使用儀器和試劑：

    高效液相色譜儀；紫外分光光度計；電子分析天平；超純水機；組織搗碎機；

    漩渦混勻器；超聲波清洗器；高速冷凍離心機；固相萃取儀；氮吹儀。

試劑：三聚氰胺標準品；乙腈HPLC級；庚烷磺酸鈉；及色譜純或分析純。

二、溶液配制

三聚氰胺標準溶液：稱取0.100g(精確至0.1mg)的三聚氰胺標準品，用甲醇水溶液（1+1）超聲待溶解后冷卻定容于100ml棕色容量瓶中，該濃度為1.0mg/ml，于4℃內(nèi)儲存，有效期3個月。移取該標準儲備液用流動相逐級稀釋，配制成一系列濃度的工作溶液。

離子對試劑溶液：準確稱量2.02g庚烷磺酸鈉和2.10g檸檬酸，加水定容至1000ml容量瓶中，0.45μm水系濾膜抽濾后備用。

三、材料

羅非魚、對蝦。羅非魚去鱗、去皮取背部和腹部肌肉；對蝦去頭、去殼、去附肢，取肌肉部分。用高速搗碎機將樣品搗碎后置-18℃以下保存。實驗時將樣品自然解凍至室溫。

四、樣品前處理方法

1.直接提取處理方法

稱取5g(精確至0.01g)樣品于50ml離心管內(nèi)，準確加入10ml提取液，渦旋混合均勻1min，振蕩提取20min，靜止2min后，于5000r/min的離心機上離心10min，取上清液2ml轉移至2ml離心管中，于8000r/min的高速離心機離心8min。取上清液過0.2μm濾膜上機測定。

2.過固相萃取柱處理方法

稱取5g(精確至0.01g)樣品于50ml玻璃比色管內(nèi)，準確加入提取液20ml混勻，超聲20min，冷卻至室溫，取上層提取液9000r/min離心10min，取上清液5ml過預先經(jīng)3ml甲醇、3ml水活化的HyperSep Retain-CX固相萃取小柱，再依次用3ml水和3ml甲醇洗滌，棄去流出液，至過柱速度不超過1.0ml/min。抽至近干后，以5ml氯水-甲醇溶液（5%）洗脫，收集流出液，于50℃下水浴氯氣流吹干。向殘留物中準確加入1.0ml甲醇水（2+8）溶液，渦旋混合1min，過0.2μm有機濾膜，上機測定。

五、色譜條件

色譜柱：DIKMA C18(250mm×4.6mm,5μm)；

流動相：乙腈：離子對試劑溶液=8+92(體積比)；

流速為1.2ml/min；

檢測波長:236nm；

柱溫：40℃；

進樣量：20μL；

流動相使用前過0.45μm濾膜。

以上內(nèi)容摘自黃春麗等注的《水產(chǎn)品中三聚氰胺的快速檢測方法》。

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