有許多方法適用于定量樣品中核酸的數(shù)量，但紫外-可見光吸光度法是確定樣品中 DNA 或 RNA 濃度和純度的主要方法。

單鏈和雙鏈 DNA 都強(qiáng)烈吸收峰值吸光度波長為 260nm 的紫外線。簡單的濃度和純度測量涉及直接以微量方法或包含在塑料或玻璃比色皿中穿過樣品的光譜。根據(jù) Beer-Lambert 定律，光穿過樣品的衰減與濃度和光穿過樣品的距離成正比

DNA 可以吸收亞可見光譜上光的目標(biāo)物質(zhì)。各種蛋白質(zhì)的芳香族氨基酸和核糖核酸 （RNA） 都吸收大約 260 – 280nm 的光。鑒于難以確保樣品的絕對(duì)純度，樣品可能含有各種可能導(dǎo)致紫外吸光度的污染物。這可能會(huì)導(dǎo)致高估樣品中 DNA 的濃度。評(píng)估這些污染物對(duì)測量影響的純度比用于識(shí)別潛在的樣品問題。

紫外-可見分光光度法的工作原理

紫外-可見分光光度計(jì)配備了一個(gè)或多個(gè)入射光源通道，覆蓋了整個(gè)紫外-可見 （UV-Vis） 電磁光譜 （190 – 840nm）。分析人員使用特定波長范圍內(nèi)的光脈沖選擇性地詢問分離的樣品。紫外-可見光檢測器實(shí)時(shí)獲取樣品的透射光譜，從而獲得樣品總光譜輸出的高分辨率測量值。這種分辨率和測量準(zhǔn)確度對(duì)于根據(jù)目標(biāo)分析物的光譜指紋圖譜定量目標(biāo)分析物至關(guān)重要。

使用 DeNovix 對(duì) DNA 進(jìn)行紫外-可見光定量

DeNovix 一直參與超微量技術(shù)的開發(fā)，他們的執(zhí)行官曾是 NanoDrop™ Technologies Inc. 的創(chuàng)始合伙人兼總裁。此后，DeNovix 開發(fā)了紫外-可見分光光度計(jì)之一，具有很高的精度和市場上最寬的動(dòng)態(tài)范圍。