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無血清細(xì)胞凍存液可用于凍存人和各種動物細(xì)胞株

來源：賽爾瑞成（北京）生命科學(xué)技術(shù)有限公司 2025年06月23日 06:14

　　無血清細(xì)胞凍存液是一種專為細(xì)胞凍存設(shè)計的溶液，不含血清成分，適用于人和各種動物細(xì)胞株的凍存。以下是使用無血清細(xì)胞凍存液凍存細(xì)胞的具體方法：

　　一、準(zhǔn)備工作

　　材料與工具：

　　凍存液（需提前預(yù)冷至4℃）。

　　細(xì)胞株（對數(shù)生長期，狀態(tài)良好）。

　　離心管、移液器、凍存管。

　　程序降溫盒或異丙醇凍存盒（可選）。

　　-80℃冰箱或液氮罐（長期儲存）。

　　注意事項：

　　所有操作需在無菌條件下進(jìn)行，避免污染。

　　凍存液需提前預(yù)冷，減少溫度沖擊對細(xì)胞的傷害。

　　細(xì)胞凍存前需確保狀態(tài)良好，避免凍存受損或老化的細(xì)胞。

　　二、無血清細(xì)胞凍存液具體步驟

　　1. 細(xì)胞收集

　　將細(xì)胞從培養(yǎng)皿中消化下來，制成單細(xì)胞懸液。

　　離心去除消化液，棄上清。

　　2. 細(xì)胞計數(shù)

　　使用血細(xì)胞計數(shù)板或自動化細(xì)胞計數(shù)儀，計算細(xì)胞密度。

　　調(diào)整細(xì)胞濃度至適宜范圍。

　　3. 配制凍存液

　　將細(xì)胞凍存液與細(xì)胞懸液按比例混合（通常為1:1或根據(jù)說明書調(diào)整）。

　　例如：將1 mL細(xì)胞懸液與1 mL預(yù)冷的無血清凍存液混合，使細(xì)胞密度符合要求。

　　4. 分裝凍存管

　　將混合好的細(xì)胞懸液分裝至凍存管中，每管1~1.5 mL。

　　擰緊凍存管蓋，標(biāo)記細(xì)胞名稱、凍存日期等信息。

　　5. 程序降溫

　　方法1：程序降溫盒：

　　將凍存管放入程序降溫盒中，按照預(yù)設(shè)程序降溫至-80℃。

　　然后將凍存管轉(zhuǎn)移至液氮罐中長期儲存。

　　方法2：異丙醇凍存盒：

　　將凍存管放入異丙醇凍存盒中，直接放入-80℃冰箱，利用異丙醇緩慢釋放熱量實現(xiàn)程序降溫。

　　方法3：手動降溫（應(yīng)急）：

　　將凍存管先放入4℃冰箱30分鐘，再轉(zhuǎn)入-20℃冰箱1~2小時，最后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱過夜，次日轉(zhuǎn)移至液氮罐。

　　6. 無血清細(xì)胞凍存液長期儲存

　　將凍存管轉(zhuǎn)移至液氮罐中，確保液氮覆蓋凍存管頂部，避免細(xì)胞復(fù)溫。

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