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全自動氨基酸分析儀基于離子交換色譜原理，結(jié)合茚三酮柱后衍生和光度法檢測技術(shù)，實現(xiàn)對氨基酸的高效分離與定量分析。其核心在于利用陽離子交換樹脂對氨基酸的特異性吸附作用，結(jié)合流動相的pH梯度洗脫，實現(xiàn)復(fù)雜樣品中氨基酸的精準(zhǔn)分離。
技術(shù)原理
氨基酸混合物在流動相（緩沖溶液）推動下，流經(jīng)裝有陽離子交換樹脂的色譜柱。不同氨基酸因結(jié)構(gòu)、酸堿性、極性差異，與樹脂中的交換基團(tuán)發(fā)生離子交換，吸附能力不同。通過調(diào)節(jié)洗脫液的pH值和離子濃度，氨基酸按洗脫能力順序逐一釋放。洗脫出的氨基酸與茚三酮試劑在柱后反應(yīng)器中混合，于115-120℃下發(fā)生顯色反應(yīng)，生成紫色或黃色化合物。這些有色產(chǎn)物在570nm（紫色）和440nm（黃色）波長下的吸光度與氨基酸濃度呈線性關(guān)系，符合朗伯-比爾定律，從而實現(xiàn)定量分析。
工作流程
樣品處理：蛋白質(zhì)樣品需經(jīng)酸水解或酶解，將蛋白質(zhì)分解為游離氨基酸。游離氨基酸樣品可直接上樣。
氨基酸分離：樣品注入色譜柱后，通過三梯度分離技術(shù)（溫度、濃度、pH梯度）優(yōu)化分離效果，確保難分離組分（如色氨酸）的分離度。
檢測與數(shù)據(jù)處理：分離后的氨基酸與茚三酮反應(yīng)生成有色產(chǎn)物，經(jīng)可見光檢測器檢測吸光度。儀器自動繪制色譜圖，通過峰面積計算氨基酸含量，并生成定量報告。
該技術(shù)具有高靈敏度（檢測限可達(dá)3-50pmol）、高重現(xiàn)性（峰面積重現(xiàn)性RSD≤1%）和自動化程度高的特點，廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。
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