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超高效液相色譜儀標準化操作流程與技術要點解析

來源：上海分析儀器銷售中心第一營業(yè)部 2025年05月18日 01:50

　　超高效液相色譜儀作為現(xiàn)代實驗室的核心分析設備，其規(guī)范操作直接影響檢測數(shù)據(jù)的可靠性。本文將從儀器準備、參數(shù)設置到日常維護全流程解析操作規(guī)范，為實驗人員提供標準化操作指南。

　　一、開機前準備與系統(tǒng)檢查

　　1.環(huán)境要求確認：實驗室溫度需穩(wěn)定在20-25℃，濕度控制在40%-60%，避免陽光直射與震動干擾

　　2.氣源壓力檢查：設定流動相脫氣機壓力為0.3-0.4MPa，確認氦氣純度

　　3.溶劑系統(tǒng)準備：使用HPLC級溶劑，按照標準比例配置流動相（如A：水含0.1%甲酸，B：乙腈含0.1%甲酸），使用0.45μm濾膜過濾后超聲脫氣15分鐘

　　二、系統(tǒng)初始化與平衡

　　1.管路沖洗程序：依次用甲醇/水(60:40)沖洗泵、進樣閥、色譜柱60分鐘

　　2.壓力測試確認：設置流速0.5 mL/min，觀察基線穩(wěn)定性，確保壓力波動＜±2%（如Waters ACQUITY H-Class）

　　3.波長校準：以氘燈/鎢燈為光源，校準檢測器在254nm處的吸收值（誤差＜±1nm）

　　三、進樣操作規(guī)范

　　1.樣品預處理：固體樣品需制成0.2-1.0 mg/mL濃度，經(jīng)過0.22μm濾膜過濾；生物樣品需酶解處理

　　2.進樣器維護：每批次分析后用流動相清洗進樣針5次，每周用65%硝酸浸泡30分鐘

　　3.進樣量控制：梯度洗脫時進樣體積＜10μL（如Agilent 1290 Infinity II），等度洗脫可適當增加至20μL

　　四、檢測參數(shù)優(yōu)化

　　1.梯度洗脫程序：水相與有機相比例需線性變化，如0-5min(20:80)至20min(80:20)，切換時間差＜0.1min

　　2.流速控制：根據(jù)色譜柱規(guī)格調整（4.6×250mm柱適用1.0 mL/min，2.1×100mm柱適用0.3 mL/min）

　　3.檢測波長選擇：優(yōu)先采用化合物最大吸收波長，必要時采用多波長檢測（如UV 254nm/280nm雙波長）

　　五、數(shù)據(jù)處理與結果驗證

　　1.積分參數(shù)設置：峰寬閾值≥5s，斜率靈敏度10-20μV/s，拖尾因子≤1.5

　　2.定量方法驗證：R2值＞0.999，回收率95-105%，RSD＜2%（n=5）

　　3.原始數(shù)據(jù)存儲：按照GLP要求保存原始色譜圖，保留時間差＜0.2min（重復性實驗）

　　六、系統(tǒng)維護與安全規(guī)范

　　1.日常維護要點：

　　①每日檢查密封圈狀態(tài)，每周更換自動進樣器轉子密封

　?、诿吭鲁暻逑疵摎鈾C管路，每季度校驗流速準確性

　　2.關機程序：

　?、儆眉兗状?水(50:50)以1mL/min沖洗系統(tǒng)30分鐘

　?、诒３种鶞叵錅囟仍?0-15℃待機

　　3.安全注意事項：

　?、俳钩瑝翰僮鳎▔毫ΡＷo閾值設為30-35MPa）

　?、趶U液集中收集處理，避免有機溶劑泄漏

　　結語

　　通過嚴格執(zhí)行上述操作規(guī)范，可使超高效液相色譜儀保持最佳運行狀態(tài)。規(guī)范操作不僅保障數(shù)據(jù)準確性，更能延長系統(tǒng)使用壽命（正常達10年以上），為精準分析提供可靠技術支撐。

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