凝膠色譜憑借其溫和的分離條件、可量化的分離效果，已成為現(xiàn)代分離科學(xué)中不可少的工具。隨著新型填料和檢測(cè)技術(shù)的突破，其在準(zhǔn)確醫(yī)療、新材料研發(fā)等領(lǐng)域的應(yīng)用前景將更加廣闊。
現(xiàn)代凝膠色譜儀通常包含五大模塊：
1.輸液系統(tǒng)：高壓恒流泵(可達(dá)5000 psi)確保流動(dòng)相穩(wěn)定輸送；
2.進(jìn)樣系統(tǒng)：自動(dòng)進(jìn)樣器支持多樣品序列分析；
3.色譜柱：填充球形硅膠或瓊脂糖凝膠(粒徑3-10μm)，理論塔板數(shù)可達(dá)105/m；
4.檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器(波長(zhǎng)254/280nm)、示差折光檢測(cè)器(RI)或多角度激光光散射檢測(cè)器(MALS)；
5.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：配備GPC軟件進(jìn)行分子量校準(zhǔn)與譜圖解析。
凝膠色譜儀的測(cè)定步驟：
1.樣品準(zhǔn)備：將待測(cè)樣品溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┲?，確保樣品溶解且無(wú)雜質(zhì)。對(duì)于生物樣品，可能需要進(jìn)行預(yù)處理，如離心、過(guò)濾等，以去除不溶物和雜質(zhì)。
2.色譜柱裝填：選擇合適的凝膠填料，根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求裝填到色譜柱中。裝填過(guò)程中要確保凝膠均勻分布，無(wú)氣泡和裂縫。
3.流動(dòng)相選擇：根據(jù)樣品的性質(zhì)和實(shí)驗(yàn)要求，選擇合適的流動(dòng)相。流動(dòng)相應(yīng)能夠溶解樣品，并與凝膠填料相容。
4.樣品進(jìn)樣：將準(zhǔn)備好的樣品通過(guò)進(jìn)樣器注入到色譜柱的頂部，確保樣品均勻分布在凝膠表面。
5.洗脫與分離：開(kāi)啟流動(dòng)相，使其通過(guò)色譜柱。由于凝膠的分子篩效應(yīng)，不同大小的分子將以不同的速度在色譜柱中移動(dòng)，從而實(shí)現(xiàn)分離。
6.檢測(cè)與記錄：使用適當(dāng)?shù)臋z測(cè)器(如紫外檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器等)監(jiān)測(cè)流出的液體，并記錄各組分的保留時(shí)間和峰面積等信息。
7.數(shù)據(jù)處理與分析：根據(jù)記錄的數(shù)據(jù)，計(jì)算各組分的相對(duì)分子質(zhì)量、含量等信息，并進(jìn)行進(jìn)一步的分析和討論。
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