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高保真限制性內(nèi)切酶有什么應(yīng)用？

閱讀：442 發(fā)布時(shí)間：2025-4-27

　　限制性內(nèi)切酶是一種能夠識(shí)別雙鏈DNA分子中特定核苷酸序列，并在特*位置切割DNA鏈中的磷酸二酯鍵的一類酶，簡(jiǎn)稱限制酶。高保真限制性內(nèi)切酶是一類經(jīng)過(guò)基因工程改造的分子生物學(xué)工具酶，能夠特異性識(shí)別并切割雙鏈DNA分子中的特定核苷酸序列，同時(shí)在反應(yīng)過(guò)程中保持較低的非特異性切割活性。

　　優(yōu)勢(shì)：

　　高切割效率：基因工程改造提升酶促反應(yīng)速率，單位時(shí)間內(nèi)可處理更多樣本。

　　寬反應(yīng)條件范圍：耐受pH、離子強(qiáng)度波動(dòng)，兼容不同來(lái)源DNA樣本。

　　高保真限制性內(nèi)切酶的應(yīng)用：

　　1、基因工程：用于構(gòu)建基因表達(dá)載體，實(shí)現(xiàn)外源基因的精準(zhǔn)插入；在基因敲除/替換實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)特異性切割目標(biāo)序列完成基因編輯。

　　2、分子克?。呵懈頟CR產(chǎn)物與載體DNA，通過(guò)黏性末端互補(bǔ)連接實(shí)現(xiàn)重組DNA分子構(gòu)建，平末端產(chǎn)物則適用于T4 DNA連接酶介導(dǎo)的連接反應(yīng)。

　　3、表觀遺傳學(xué)研究：對(duì)DNA甲基化狀態(tài)敏感的酶可用于分析甲基化位點(diǎn)對(duì)基因表達(dá)的影響。

　　4、測(cè)序與SNP鑒定：作為測(cè)序預(yù)處理工具，通過(guò)產(chǎn)生可預(yù)測(cè)的酶切片段輔助DNA序列分析；在ddPCR中用于靶向片段富集。

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