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細(xì)胞學(xué)堂 | 如何判斷細(xì)胞狀態(tài)

時(shí)間:2023-9-28 閱讀:1677
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培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),由于培養(yǎng)的環(huán)境各不相同,同時(shí)細(xì)胞各階段的形態(tài)也存在一定差異,沒(méi)有一個(gè)確定的參照物去比對(duì),很多老師同學(xué)也無(wú)法確定自己所養(yǎng)細(xì)胞的狀態(tài)是否正常。

那么如何判斷細(xì)胞狀態(tài)是正常還是異常呢?本期細(xì)胞學(xué)堂將詳介紹幾種常用的判斷方法,學(xué)會(huì)這幾招,輕松辨別細(xì)胞狀態(tài)!




01 如何判斷細(xì)胞活率





臺(tái)盼藍(lán)染色法




臺(tái)盼藍(lán)是細(xì)胞活性染料,常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性,可以檢測(cè)出細(xì)胞是否存活。正常的活細(xì)胞,胞膜結(jié)構(gòu)完整,能夠排斥臺(tái)盼藍(lán),使之不能夠進(jìn)入胞內(nèi);而喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞,胞膜的通透性增加,可被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色。

通常認(rèn)為細(xì)胞膜完整性喪失,即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡。活細(xì)胞不著色,而死細(xì)胞會(huì)被染成藍(lán)色。




圖片

(無(wú)色為活細(xì)胞,藍(lán)色為死細(xì)胞)

圖片

染色時(shí)間不能太長(zhǎng),3分鐘內(nèi)觀察,超時(shí)后活細(xì)胞也會(huì)逐漸積累染料而染成顏色,使檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)偏差。





顯微鏡觀察法




在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài):


懸浮細(xì)胞

活細(xì)胞透亮有光澤,死細(xì)胞暗淡無(wú)光且膜碎裂;


貼壁細(xì)胞

活細(xì)胞可貼壁且膜完整,死細(xì)胞不能貼壁。


圖片

(紅色圈為死細(xì)胞;綠色圈為活細(xì)胞;箭頭為血清雜質(zhì))


細(xì)胞膜作為判斷細(xì)胞活性的標(biāo)準(zhǔn)之一,有的老師用“邊界清晰"來(lái)界定,認(rèn)為邊界不清晰則是細(xì)胞狀態(tài)變差,實(shí)際情況我們也有發(fā)現(xiàn)部分細(xì)胞膜邊緣很薄再加上顯微鏡不清晰導(dǎo)致誤判,所以小普認(rèn)為膜邊界是否清晰并不是金標(biāo)準(zhǔn),我們更傾向于以細(xì)胞膜完整性作為判斷標(biāo)準(zhǔn),“膜完整"則為活細(xì)胞。


圖片

(該細(xì)胞膜邊緣薄透,若為黃光顯微鏡可能看不清)






02  如何判斷細(xì)胞形態(tài)異常


圖片


1

你的細(xì)胞應(yīng)該長(zhǎng)成什么樣?

在懷疑細(xì)胞形態(tài)改變之前,我們首先得知道一個(gè)正常的細(xì)胞應(yīng)該是什么樣的,誠(chéng)如每顆多肉都會(huì)有其獨(dú)-特的色彩和習(xí)性,細(xì)胞也有其獨(dú)-特的習(xí)性,包括生長(zhǎng)速度、形態(tài)、培養(yǎng)環(huán)境等;




圖片



2

從哪幾個(gè)方面判定細(xì)胞形態(tài)異常?


細(xì)胞的微環(huán)境會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)改變,例如血清直接影響細(xì)胞的形態(tài):



圖片

HK-2細(xì)胞顯微圖(無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng))




圖片

HK-2細(xì)胞顯微圖(MEM +10%FBS培養(yǎng))




是否所有的形態(tài)改變都可以被定義為異常呢?答案是否定的。從上述例子中可以看出,兩種培養(yǎng)環(huán)境下細(xì)胞形態(tài)不同,但狀態(tài)都并無(wú)異常,因此我們需要視不同情況、綜合細(xì)胞增長(zhǎng)速度進(jìn)行評(píng)判:



未更換培養(yǎng)體系時(shí)

在培養(yǎng)體系沒(méi)有更換的前提下,細(xì)胞碎裂增多,黑點(diǎn)增多、形態(tài)改變、生長(zhǎng)速度變慢,則應(yīng)考慮外源刺激物導(dǎo)致,可能已被污染,需排查污染源,并做針對(duì)性的預(yù)防措施。

更換了培養(yǎng)體系時(shí)

1

如果是因?yàn)楦鼡Q了培養(yǎng)體系后導(dǎo)致的細(xì)胞形態(tài)改變,在細(xì)胞生長(zhǎng)速度正常的情況下,可正常培養(yǎng);

2

如果細(xì)胞更換培養(yǎng)條件后,嚴(yán)重變形甚至貼壁減少且不能正常傳代,必須進(jìn)行干預(yù),可通過(guò)包被培養(yǎng)瓶促進(jìn)貼壁、增加血清濃度、與原培養(yǎng)基混合使用讓細(xì)胞過(guò)渡適應(yīng)等方式進(jìn)行改善;

3

如果細(xì)胞對(duì)于新環(huán)境反應(yīng)激烈,直接死亡,則需更換培養(yǎng)體系;






03  如何判斷細(xì)胞污染




細(xì)菌污染


有以下特征之一,應(yīng)考慮細(xì)菌污染:

1

顯微鏡高倍鏡下可觀察到直徑比細(xì)胞小的高度重復(fù)顆粒;

2

細(xì)菌顆粒會(huì)持續(xù)快速增多;

3

培養(yǎng)基迅速變黃或者渾濁;

圖片







真菌污染


有以下特征之一,應(yīng)考慮細(xì)菌污染:

1

培養(yǎng)基里肉眼可見(jiàn)霉菌菌落;

2

顯微鏡下異物邊緣呈掃帚邊、樹(shù)枝狀;

圖片







交叉污染


細(xì)胞交叉污染比較少見(jiàn),也較難辨別,除非形態(tài)特征差別很大的兩個(gè)細(xì)胞交叉污染,才能從顯微鏡肉眼辨別,主要還是依賴鑒定技術(shù),可以通過(guò)STR鑒定、同工酶等方法來(lái)進(jìn)行鑒定。


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