PriCells: 正常人組織源性鼻咽上皮細(xì)胞的培養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)材料：

1. 一般來(lái)自鼻咽癌活檢組織或引產(chǎn)胚胎的鼻咽組織；

2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素，pH7.2；

3. 培養(yǎng)基：可使用ROMI1640培養(yǎng)液，添加20%胎牛血清、5μg/ml胰島素、2.7×10-7 mol/L氫化可de松。也可用DMEM培養(yǎng)液；

4. 低血清培養(yǎng)液與無(wú)血清培養(yǎng)液：基礎(chǔ)培養(yǎng)液均為DMEM/F12（1:1，V/V）混合液。配置時(shí)，添加1.2g/L NaHCO3及15 mmol/L HEPES。低血清培養(yǎng)液是在基礎(chǔ)培養(yǎng)液中再加入5μg/ml胰島素、5ng/ml表皮生長(zhǎng)因子、0.3mg/ml谷氨酰胺、100 IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素、5×10-7 mol/L氫化可de松以及1.25%胎牛血清。若去掉低血清培養(yǎng)液中的胎牛血清，再加1mg/ml牛血清白蛋白及10μg/ml轉(zhuǎn)鐵蛋白，即為無(wú)血清培養(yǎng)液；

5. 消化液：0.02%EDTA-0.25%胰蛋白酶溶液，用D-Hanks液配制；

實(shí)驗(yàn)方法：

1. 取胚齡4—6個(gè)月水囊引產(chǎn)的胚胎，在無(wú)菌條件下分離鼻咽粘膜。若取材于鼻咽癌活檢組織，則須將組織置于含高濃度抗生素（青霉素500 IU/ml、鏈霉素500μg/ml）的Hanks液中，在4℃下處理1小時(shí)；

2. 用Hanks液（含青霉素100 IU/ml、鏈霉素100μg/ml）漂洗2次，除去血kuai；

3. 將所取材料剪成0.5—1mm3的碎片，再用Hanks液充分漂洗；

4. 將植塊種植到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)作干貼壁。翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，在瓶中加入2mlRPMI 1640培養(yǎng)液，在37℃培養(yǎng)箱中靜置數(shù)小時(shí)；

5. 待植塊牢固貼壁后，輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使培養(yǎng)液均勻覆蓋住植塊。在37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)； 培養(yǎng)24小時(shí)后換液，去除未貼壁細(xì)胞后繼續(xù)培養(yǎng)，以后每周換液2—3次；

6. 3天后，去除未貼壁的植塊。每3天換半量培養(yǎng)液；

7. PriCells-原代上皮細(xì)胞細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基；

8. PriCells-原代上皮細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑；

9. PriCells-原代細(xì)胞分離試劑盒；

10. PriCells-原代細(xì)胞鑒定試劑盒；