PriCells: 動物淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的分離

基本方案2：

植塊培養(yǎng)法

實驗材料：

1. 哺乳動物胸導(dǎo)管或腸系膜淋巴管

2. 1%明膠鋪底，置超凈臺晾干

3. 1×PBS，含青霉素100u/ml和鏈霉素100μg/ml，pH7.4

4. 眼科剪，眼科鑷

5. 慕絲線（7號線）、細(xì)鐵絲

6. 離心管（15ml、50ml）

實驗方法：

1. 處死動物后，打開胸腔，分離胸導(dǎo)管，在胸導(dǎo)管上端結(jié)扎，切取10-15cm的一段。將胸導(dǎo)管放入預(yù)冷PBS中漂洗。

2. 在解剖顯微鏡下，用眼科剪和眼科鑷剝除外膜的脂肪和纖維組織，然后用PBS反復(fù)沖洗3次。用虹膜剪縱向切開管腔，再用PBS沖洗管腔面。然后，將管腔剪成約1mm3的小塊。

3. 將組織快放入培養(yǎng)皿中，使內(nèi)膜面朝下，放入37℃，含5%CO2的孵箱中培養(yǎng)4h。加入培養(yǎng)液，胸導(dǎo)管組織塊能否貼壁是內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵。因此，加入培養(yǎng)液時操作要輕，以免使組織塊浮起。

4. 靜置培養(yǎng)3d后換液，以后每隔2-3d換液1次。培養(yǎng)4-6d后，內(nèi)皮細(xì)胞開始自植塊長出，細(xì)胞呈長梭形或多邊形。2-3周后，細(xì)胞生長形成單層。待細(xì)胞生長形成單層時，可傳代培養(yǎng)。

5. PriCells-原代內(nèi)皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基

6. PriCells-原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑

7. PriCells-原代細(xì)胞分離試劑盒

8. PriCells-原代細(xì)胞鑒定試劑盒