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synvolux無(wú)血清轉(zhuǎn)染方案

閱讀:100      發(fā)布時(shí)間:2025-03-28
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本方案提供了使用SAINT sRNA(目錄號(hào):SR-2003-01、SR-2003-02、SR-2003-04)。

無(wú)血清轉(zhuǎn)染方案:

1.準(zhǔn)備細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

粘附細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前一天,將細(xì)胞置于0.5ml生長(zhǎng)培養(yǎng)基血清中,使細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時(shí)融合50-80%。

懸浮細(xì)胞:在制備復(fù)合物之前,將0.5-1.5x106個(gè)細(xì)胞懸浮在0.5ml無(wú)血清生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。

2.讓SAINT sRNA小瓶達(dá)到室溫。

3.將SAINT sRNA充分渦旋約30秒。

4.使用1:40的siRNA(µg)與SAINT sRNA(µl)比率制備復(fù)合物。

5.對(duì)于每個(gè)轉(zhuǎn)染樣品,按如下步驟制備復(fù)合物:

a.在50µl PBS中稀釋0.125μg siRNA。

b.將5µl SAINT sRNA加入siRNA/PBS溶液中,輕輕重新懸浮。

7.在室溫下將混合物孵育5-10分鐘(溶液可能看起來(lái)渾濁)。

8.向細(xì)胞中添加復(fù)合物:

粘附細(xì)胞:從細(xì)胞中吸取生長(zhǎng)培養(yǎng)基,并將復(fù)合物填充至0.5ml使用無(wú)血清生長(zhǎng)培養(yǎng)基。向細(xì)胞中加入去復(fù)合物(0.5ml)。

懸浮池:將制備的復(fù)合物逐滴加入孔中。

9.在37°C的CO2孵化器中孵育細(xì)胞2-3小時(shí)。

10.在基因敲除測(cè)試前1-3天。 向孔中加入1ml含血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基,并在37°C的CO2孵化器中孵育細(xì)胞,


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