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大鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)ELISA試劑盒實驗使用說明書

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  大鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)ELISA試劑盒的實驗使用說明書如下:

  BS-3496  大鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)elisa試劑盒

  1. ?實驗原理?

  本試劑盒采用雙抗體夾心法測定樣本中大鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)的含量。首先用純化的PICP抗體包被微孔板,形成固相抗體。隨后加入樣本或標準品,與HRP標記的PICP抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物。洗滌后加入底物TMB顯色,顏色的深淺與樣本中PICP濃度呈正相關,通過酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)并計算濃度?。

  2. ?試劑盒組成?

  酶標板(預包被):96孔

  標準品:400ng/ml

  酶標抗體工作液:12ml

  標本稀釋液:12ml

  濃縮洗滌液:50ml

  TMB底物:12ml

  終止液:12ml

  第一抗體工作液:12ml?。

  3. ?樣本處理?

  血清/血漿?:采集后1000×g離心10分鐘,分離上清液。

  細胞培養(yǎng)上清液?:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒。

  組織勻漿?:加入生理鹽水搗碎,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清?。

  4. ?實驗步驟?

  加樣?:每孔加入標準品或待測樣本100μl,37℃孵育120分鐘?。

  洗滌?:用洗滌液充分洗滌4-6次,濾紙印干?。

  加入第一抗體?:每孔加入第一抗體工作液100μl,37℃孵育60分鐘?。

  顯色?:每孔加入TMB底物100μl,避光孵育15-30分鐘?。

  終止反應?:每孔加入終止液50μl,立即測定OD值?。

  5. ?結(jié)果計算?

  以標準品濃度為橫坐標,OD值為縱坐標繪制標準曲線,通過曲線計算樣本中PICP濃度?。

  6. ?注意事項?

  試劑盒需在2-8℃保存,避免反復凍融?。

  實驗過程中需使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管?。

  顯色反應需避光進行,終止后立即測定?。

  7. ?檢測范圍與靈敏度?

  檢測范圍:1.25-80ng/mL

  檢測限:0.49ng/mL?。

  以上為大鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)ELISA試劑盒的詳細使用說明,適用于科研實驗中的定量檢測?。


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