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熒光分光光度計基本原理

閱讀:3415      發(fā)布時間:2017-1-6
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熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù),從各個角度反映了分子的成鍵和結(jié)構情況。通過對這些參數(shù)的測定,不但可以做一般的定量分析,而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構象變化,從而闡明分子結(jié)構與功能之間的關系。
熒光分光光度計熒光光譜法具有靈敏度高、選擇性強、用樣量少、方法簡便、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點,可以廣泛應用于生命科學、醫(yī)學、藥學和藥理學、有機和無機化學等領域。
由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中,激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光,熒光經(jīng)過濾過和反射后,被光電倍增管所接受,然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來。
物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出,從而產(chǎn)生熒光.
不同物質(zhì)由于分子結(jié)構的不同,其激發(fā)態(tài)能級的分布具有各自不同的特征,這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜;,因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地進行物質(zhì)的鑒定。
在溶液中,當熒光物質(zhì)的濃度較低時,其熒光強度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關系,即IF=KC,利用這種關系可以進行熒光物質(zhì)的定量分析,與紫外-可見分光光度法類似,熒光分析通常也采用標準曲線法進行。 熒光分光光度計

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