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尼氏染色科研實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)介紹
閱讀：190 發(fā)布時(shí)間：2024-10-11尼氏染色
尼氏染色發(fā)明于1892年，是根據(jù)它的發(fā)明人德國科學(xué)家Franz Nissl命名的。細(xì)胞的DNA和RNA帶負(fù)電荷，這是因?yàn)樗鼈兎謩e是脫氧核糖核苷酸和核糖核苷酸組成。以脫氧核糖核苷為例，它由堿基、脫氧核糖和磷酸構(gòu)成。 其中的磷酸使DNA和RNA帶負(fù)電荷、呈酸性。尼式染色正是利用了DNA、RNA酸性的特征，用堿性的染料(比如，甲酚紫、甲苯胺藍(lán))去綁定DNA和RNA，從而將細(xì)胞著色。尼氏染色的部位主要是DNA聚集的細(xì)胞核，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，特別是粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，其上的核糖體包含的核糖體RNA占細(xì)胞RNA總量的80%以上。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)也因?yàn)槭悄崾先旧@著的染色位點(diǎn)而被稱為尼氏體。
技術(shù)原理
神經(jīng)元細(xì)胞體包括一個(gè)具有皺褶核膜的大細(xì)胞核、稀疏的染色質(zhì)和一個(gè)明顯的核仁。在細(xì)胞體中細(xì)胞質(zhì)是尼氏顆粒，即能夠代表粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)并在很多神經(jīng)元中產(chǎn)生特異的斑點(diǎn)狀嗜堿性表現(xiàn)的嗜堿性顆粒。尼氏顆?？梢杂煤芏嗳旧珌盹@示如中性紅、亞甲基藍(lán)、甲苯胺藍(lán)和甲基紫等。染色的變異、pH和分化的時(shí)間使一些染色既可以僅突出尼氏物質(zhì)，也可以顯示神經(jīng)元的細(xì)胞核和神經(jīng)膠質(zhì)。各種神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)都含有尼氏體，但其形狀、數(shù)量、分布位置常常不同。尼氏體也存在于樹突中，但不在于軸突和胞體的軸丘。尼氏體會因?yàn)樯頎顟B(tài)的變化而變化，尼氏體是神經(jīng)元內(nèi)合成蛋白質(zhì)合成的重要部位，當(dāng)神經(jīng)元受到刺激后，胞體內(nèi)的尼氏體會明顯減少。通常尼氏體能被堿性染料如硫堇、亞甲藍(lán)、甲苯胺藍(lán)和焦油紫等染料染成紫藍(lán)色。
實(shí)驗(yàn)流程
實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示：
注意事項(xiàng)：
1、切片若為石蠟切片，要在二甲苯中先脫蠟。
2、焦油紫或硫堇的染色時(shí)間也是根據(jù)染液配制時(shí)間的新舊、切片厚度和環(huán)境溫度靈活掌握。
3、應(yīng)該在顯微鏡下觀察分色程度，使尼氏小體呈深色而背底基本無色為最佳。如分色不夠，可以退回酒精再次分色。如分色過度，也可退回再染。
4、尼氏染色應(yīng)充分脫水，否則容易褪色。
5、HE染色方法雖然也能觀察到胞質(zhì)中嗜堿性顆粒，但結(jié)構(gòu)不甚清晰，神經(jīng)元的軸突、樹突難以辨認(rèn)。在尼氏染色中尼氏體清晰可辨，而且很容易區(qū)分軸突和樹突。尼氏染色中尼氏體受染后呈塊狀（形如虎斑）或顆粒狀，核周圍尼氏體顆粒較大，近邊緣處較小而細(xì)長，如在生理情況下，尼氏體大而數(shù)量多，反映神經(jīng)細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的功能較強(qiáng)，在神經(jīng)元受損時(shí)，尼氏體的數(shù)量可減少甚至消失。