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HPTLC 通用混標-高效薄層色譜系統(tǒng)適用性測試 (SST) 新思路

閱讀:1488      發(fā)布時間:2022-7-22
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"在 HPTLC 系統(tǒng)中,每張板都代表一個新的分析體系。每次進行分析操作當天,在每個板上都應執(zhí)行 SST,以驗證其是否符合實驗條件要求。SST 通常僅適用于包含預設限值在內(nèi)的單個方法。如果 SST 失敗,則樣品檢測數(shù)據(jù)無效,無法進行評估。"


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在高效薄層色譜 (HPTLC) 中,應用合適的系統(tǒng)適用性測試 (SST) 在每個薄層板上對分析系統(tǒng)進行驗證非常重要,是數(shù)據(jù)有效性的前提,一般是選擇幾個具有特定分析方法的化學對照物質(zhì)作為參考。但目前常用的 SST 實驗設計具有一定的局限性,列舉《美國藥典》和《歐洲藥典》中關(guān)于 SST 的描述內(nèi)容可見下表:

目前常用 SST 方法及其局限性

_

美國藥典

歐洲藥典

關(guān)于

SST

的描述

使用 SST “檢查系統(tǒng)對分離度、位置和條帶顏色的適用性",選擇 “在所用色譜條件下,由兩種或多種具有相似但可分離的RF 值的化合物" 作為參考物。

SST 基于兩種具有相似 RF 值的物質(zhì)的分離,但在規(guī)定的色譜條件下幾乎不可分離。

現(xiàn)有方法

局限性

美國藥典和歐洲藥典在定義中都描述了色譜圖特定區(qū)域內(nèi)的分離情況。


對于每種方法,都需要開發(fā)一個新的系統(tǒng)適用性測試,非常耗時。


- 如果實驗室正在應用許多不同的 HPTLC 方法,則采購這些 SST 所需的化學參考物質(zhì)可能會增加常規(guī)分析的大量成本。

- 不同 SST 系列的開發(fā)和驗證也非常耗時。


SST 新思路

HPTLC 通用混標

針對上文列出的局限性,UHM 應運而生,可用于在常規(guī)分析中驗證 HPTLC 結(jié)果,實現(xiàn)對 HPTLC 色譜圖的整個 RF 范圍進行驗證。



什么是 UHM ?

UHM, the Universal HPTLC Mix,即高效薄層色譜通用混標,由 8 種不同性質(zhì)的化合物組成,廣泛適用于各種 HPTLC 方法的 SST 測試。



HPTLC 通用混標 (UHM) 的開發(fā)

01

物質(zhì)的選擇

-  選擇的物質(zhì)最好具有安全、穩(wěn)定、無需衍生化即可檢測、易于獲得且價格低廉等特點。據(jù)此,實驗人員從數(shù)以千計的物質(zhì)列表中,選擇了 24 種化合物。


-  針對這 24 種化合物在 HPTLC 板上的色譜行為進行研究,分別用 20 種不同展開劑進行洗脫,涵蓋盡量廣泛的極性和選擇性,最終從中選擇了 8 種化合物:鳥苷、舒利苯酮、胸苷、撲熱息痛、鄰苯二甲酰亞胺、氫芴、噻噸酮和 2-苯并三唑四甲基丁基苯酚。

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圖為 UHM 在不同展開系統(tǒng)下的色譜行為,在各條件下的選擇性均可保證至少 3 - 4 個有效化合物的條帶均勻分布在所需評估的范圍內(nèi)


02

評估響應特性

- 相對濕度對每種物質(zhì)的選擇性有不同的影響。當板的活性偏離預期的相對濕度 0 - 5%、33%、75% 或 100% 時,UHM 的響應特性可以清楚地檢測出這些偏離。


- 對甲苯-乙酸乙酯 90:10 (V/V) 的展開劑組成施加每種組分溶劑 ±10% 的變化,用 UHM 獲得的 HPTLC 指紋圖譜有顯著反應。


- 針對相同的展開劑進行不同飽和參數(shù)設置的考察(不飽和、部分飽和和充分飽和)。結(jié)果表明,部分飽和 RF 值相對增加,而*飽和 RF 值相對降低,UHM 可以檢測飽和操作的一般影響。



03

評估 UHM 性能

- 分別在實驗室內(nèi)和實驗室間進行檢測,使用 3 種展開劑并得出 ΔRF,評估 UHM 性能。


- 在實驗室內(nèi)試驗中,ΔRF 為 0.029; 實驗室間試驗為 0.040。



04

評估不同類型的硅膠薄層板

- 在色譜系統(tǒng)中薄層板的材料是一個關(guān)鍵參數(shù)。由于硅膠的規(guī)格不同,例如不同的粘合劑或熒光指示劑的存在,不同的薄層板可能會有不同的選擇性。


- 使用 UHM 評估了 6 種不同類型的涂敷型硅膠薄層板,使用相同的展開劑,乙酸乙酯-甲酸-乙酸-水 100:11:11:26 (V/V)。

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UHM 在不同類型硅膠薄層板上的選擇性評估



UHM 與現(xiàn)行 SST 比較



使用 UHM 和現(xiàn)行的 SST 進行精油標準鑒別。

- 在原有方法中乙酸異丁香酚 [1a] 和異丁香酚 [1b] 被定義為 SST。作為特定標記物,使用的是芳樟醇和乙酸芳樟酯,或冰片和乙酸冰片酯。在這個例子中,還測試了 3 種精油:薄荷油、薰衣草油和肉豆蔻油。


- 針對 UHM 和當前 SST 的每個成分,計算平均 RF 值及其預測區(qū)間。下圖數(shù)據(jù)表明,UHM 成分的預測區(qū)間與原始 SST 的預測區(qū)間在同一范圍內(nèi)。

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UHM 成分的預測區(qū)間與原始 SST 的預測區(qū)間在同一范圍內(nèi)

數(shù)據(jù)來源: CAMAG 與 Anchrom 印度合作實驗室



總結(jié)

- HPTLC 通用混標 (UHM) 是當前 SST 的一個很好的替代方法。

- 8 種不同極性、不同化學類別組分的混合物價格低廉、穩(wěn)定,對驗證色譜系統(tǒng)的變化具有良好的響應性。

- 與當前的 SST 相比,UHM 的成分顯示出與已建立的 SST 的物質(zhì)和特定標記物具有相似的預測區(qū)間。

- UHM 可以檢測展開劑梯度的變化或飽和效應,而許多已建立的 SST 通常只能描述有限的 RF 范圍。

會議內(nèi)容重溫


由此可見,高效薄層色譜越來越受實驗人員的關(guān)注,原因不單在其快速、直觀、自由衍生的技術(shù)優(yōu)勢,而且適用于復雜成分樣品的分離及檢測。從以上案例中,通過通用混標的應用,簡化 SST 方法開發(fā)周期,有效保證 HPTLC 在常規(guī)分析檢測中的數(shù)據(jù)重現(xiàn)性、有效性和可靠性。




CAMAG HPTLC PRO.jpg


CAMAG HPTLC PRO 全自動色譜系統(tǒng)實現(xiàn)連續(xù)多板之 “點樣 – 展開 – 衍生 – 檢測 – 分析 – 報告" 操作流程,是新一代的高效薄層色譜的技術(shù)。


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