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一文與您分享選擇SEC色譜柱時(shí)所需要考慮的關(guān)鍵因素

閱讀:267      發(fā)布時(shí)間:2025-4-21
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  SEC色譜柱是利用多孔填料形成固定相,大分子因無法進(jìn)入孔隙而快速通過,小分子則擴(kuò)散進(jìn)入孔隙,路徑延長導(dǎo)致洗脫延遲,按分子體積從大到小順序洗脫。該產(chǎn)品具有溫和分離特性,可保持生物分子活性,廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)、多糖、聚合物等生物大分子分析。
 
  在選擇適合的SEC色譜柱時(shí)有幾個(gè)關(guān)鍵因素需要仔細(xì)考量,以確保獲得良好分離效果和實(shí)驗(yàn)結(jié)果。下面咱們來一起了解一下吧:
 

 

  1、孔徑大小
 
  柱內(nèi)的填料顆粒具有孔結(jié)構(gòu),這些孔決定了哪些分子可以通過而哪些會被排除在外。因此,選擇正確的孔徑對于目標(biāo)分子的有效分離至關(guān)重要。一般來說,如果要分析較大分子如蛋白質(zhì)或多糖,則需選用孔徑較大的填料;而對于較小分子量的化合物,則應(yīng)選擇孔徑較小的填料。通常情況下,供應(yīng)商會提供推薦的分子量范圍作為參考。
 
  2、柱長與內(nèi)徑
 
  柱長影響著分離效率和分辨率。較長的柱子能夠提供更高的理論塔板數(shù),從而改善分辨率,但同時(shí)也會增加運(yùn)行時(shí)間和溶劑消耗。相反,較短的柱子則適合快速篩選或低分辨率需求的應(yīng)用。至于內(nèi)徑,它關(guān)系到樣品加載量以及檢測靈敏度。較大的內(nèi)徑允許更大的樣品體積,但可能會降低靈敏度;較小的內(nèi)徑則有利于提高檢測靈敏度,但對進(jìn)樣量有限制。
 
  3、填料材質(zhì)
 
  不同的應(yīng)用場合可能要求使用不同類型的填料材料。常見的有聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物(PS-DVB)和瓊脂糖等。PS-DVB適合于有機(jī)溶劑體系中的小分子分離,而瓊脂糖更適合水相體系中的生物大分子分離。此外,還需注意填料是否經(jīng)過表面修飾,比如親水性改性可以減少非特異性吸附,特別適用于蛋白質(zhì)等易變性的樣品。
 
  4、兼容性與穩(wěn)定性
 
  考慮到實(shí)際操作環(huán)境,它必須與所使用的流動相兼容,并且能夠在預(yù)期的工作溫度范圍內(nèi)保持穩(wěn)定。例如,在高溫條件下工作的系統(tǒng)中,需確認(rèn)是否能在該溫度下正常工作而不損壞。另外,對于含有緩沖鹽或其他添加劑的流動相,也需要檢查色譜柱是否能耐受。
 
  綜上所述,在選購SEC色譜柱時(shí)應(yīng)當(dāng)綜合考慮上述各個(gè)方面的需求,結(jié)合自身的實(shí)驗(yàn)條件和目標(biāo),挑選出適合自己研究項(xiàng)目的產(chǎn)品。這不僅有助于提升實(shí)驗(yàn)的成功率,還能延長使用壽命。

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