目前，單細胞組學分析大都依賴于將細胞裂解的方案，單細胞活檢是少有的非侵入性的單細胞分析方法，它允許研究人員在不殺死細胞的情況下獲取細胞的轉(zhuǎn)錄組信息，單細胞組學通過分離和分析單個細胞的分子成分來闡述細胞異質(zhì)性。從單細胞活檢中獲得的基因表達譜是裂解方案獲取細胞轉(zhuǎn)錄組的全面升級 (Chen et al., Nature, 2022)。

FluidFM OMNIUM在單細胞組學研究中的特征：

多功能單細胞顯微操作系統(tǒng)- FluidFM OMNIUM，可以自動、高效的完成單細胞提取或單細胞注射實驗，可有效應用于原位活細胞基因測序Live-seq和單細胞活檢，讓研究人員能夠在不殺死細胞的情況下對細胞進行轉(zhuǎn)錄組測定，從而為單細胞轉(zhuǎn)錄組學帶來新的范式。

• 1、在表型分型前記錄細胞轉(zhuǎn)錄組。

• 2、記錄隨時間推移的轉(zhuǎn)錄事件，以揭示分子成分如何影響細胞行為。

• 3、直接鏈接單個細胞的歷史和生長軌跡，揭示過去的細胞狀態(tài)和了解細胞的譜系決定。

• 4、在接受特定療法之前和之后，對異質(zhì)性疾病的單細胞進行活檢，以確定用于早期藥物開發(fā)的分子標簽。

FluidFM技術(shù)視頻：細胞的直接提取

FluidFM OMNIUM進行單細胞活檢的顯著優(yōu)勢：

• 無創(chuàng)單細胞活檢

在不改變基因表達、細胞表型或細胞間相互作用的情況下獲得可靠的結(jié)果。

• 通過活檢對單細胞進行連續(xù)和實時監(jiān)測

FluidFM提取保留細胞活力:在相同的運行中從相同的細胞中提取幾次或隨時間周期性地提取。

• 分析時間序列基因表達

單細胞轉(zhuǎn)錄組序列分析

Live-seq活細胞單細胞測序和單細胞活檢是如何進行：

Live-seq活細胞單細胞測序方法將FluidFM OMNIUM系統(tǒng)與高靈敏度的低輸入RNA-seq方案配對。FluidFM OMNIUM可以從活單細胞的細胞室中提取亞皮升體積，然后分離提取物進行進一步分析。通過避免破壞性方法(如細胞裂解)，可以在同一細胞上進行進一步的下游分子和表型分析，甚至隨著時間的推移進行轉(zhuǎn)錄組分析。這將為您的轉(zhuǎn)錄組學、代謝組學、蛋白質(zhì)組學或任何其他組學研究引入發(fā)展路徑分析而不是終點分析。

• · 專屬的——在FluidFM操作軟件中內(nèi)置了專屬的Live-seq應用工作流程。

• · 易用的——僅需在電腦界面上用鼠標進行指向和點擊的操作即可。

• · 先進的——空心的、具有力學感應的FluidFM探針（請參考下面FluidFM探針圖）

FluidFM探針：用金字塔的橫截面可以看到鏤空的中間通道。

FluidFM技術(shù)進行單細胞組學研究相關(guān)文章：

使用Live-seq進行全基因組測序

來自中國科學院深圳先進技術(shù)研究院的陳萬澤研究員等展示了Live-seq活細胞單細胞測序技術(shù)的建立，這是一種利用FluidFM技術(shù)提取RNA并保留細胞活力的單細胞轉(zhuǎn)錄組分析方法。通過使用巨噬細胞暴露于脂多糖(LPS)的模型，他們能夠根據(jù)影響巨噬細胞LPS反應異質(zhì)性的能力進行全基因組排序。此外，研究表明Live-Seq可用于連續(xù)描繪LPS刺激前后單個巨噬細胞的轉(zhuǎn)錄組。這使得細胞軌跡的直接映射成為可能，并將scRNA-seq從終點法跨越到突破性的時間分析方法。

W. Chen, O. Guillaume-Gentil, P. Yde Rainer, C. G. G?belein, W. Saelens, V. Gardeaux, A. Klaeger, R. Dainese, M. Zachara, T. Zambelli, J. A. Vorholt & B. Deplancke. Live-seq enables temporal transcriptomic recording of single cells. (Aug 2022) Nature, doi:10.1038/s41586-022-05046-9.

單細胞提取質(zhì)譜聯(lián)用

來自ETH的Guillaume等利用FluidFM技術(shù)，通過亞皮升分辨率無損定量地提取細胞內(nèi)液，然后進行飛行時間質(zhì)譜分析。通過這種方法，他們從單個HeLa細胞質(zhì)中檢測和鑒定了幾個代謝物。通過13C-Glucose攝取實驗進行了驗證，這表明代謝物采樣結(jié)合質(zhì)譜分析是可能的，同時保留了生理環(huán)境和被分析細胞的活力。

O. Guillaume-Gentil, T. Rey, P. Kiefer, A.J. Ibá?ez, R. Steinhoff, R. Br?nnimann, L. Dorwling-Carter, T. Zambelli, R. Zenobi & J.A. Vorholt. Single-Cell Mass Spectrometry of Metabolites Extracted from Live Cells by Fluidic Force Microscopy. (May 2017) Anal Chem., 89(9), 5017-5023. doi:10.1021/acs.analchem.7b00367.

單細胞提取后細胞內(nèi)分子成分分析

來自ETH的Guillaume等證明了使用FluidFM以亞皮升的分辨率對單細胞的細胞質(zhì)和核質(zhì)部分進行定量采樣，然后對從細胞質(zhì)或細胞核中提取的可溶性分子進行全面分析，包括檢測酶活性和轉(zhuǎn)錄豐度等。

O. Guillaume-Gentil, R.V. Grindberg, R. Kooger, L. Dorwling-Carter, V. Martinez, D. Ossola, M. Pilhofer, T. Zambelli & J.A. Vorholt. Tunable Single-Cell Extraction for Molecular Analyses. (Jul 2016) Cell, 166(2), 506-516. doi: 10.1016/j.cell.2016.06.025.

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