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花生油和糧谷中黃曲霉毒素的檢測——UPLC-MS/MS法
黃曲霉毒素包括B1、B2、G1、G2、M1、M2等多種形式，但是目前有關(guān)這些毒素的檢測方法很少，且以酶聯(lián)免疫(ELISA)法和薄層色譜(TLC)法等篩選方法檢測黃曲霉毒素B1為主；液相色譜法(HPLC)容易受到雜質(zhì)干擾，而且檢出限很難達到要求。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)是一種集分離和多組分定性、定量于一體的系統(tǒng)，已成為近年來研究黃曲霉毒素檢測的主要方向，并已經(jīng)應(yīng)用到黃曲霉毒素的污染檢測中。
方法優(yōu)勢：
迪馬科技開發(fā)的《花生油和糧谷中黃曲霉毒素的檢測-UPLC-MS/MS法》采用固相萃取-UPLC-MS/MS法，可同時檢測5種黃曲霉毒素，并能夠達到準確定性定量，檢出限是0.5 μg/kg，遠低于國家標準《GB 2761-2011 食品安全國家標準 食品中真菌毒素*》；對比國標方法《GB/T 18979-2003 食品中黃曲霉毒素的測定 免疫親和層析凈化液相色譜法和熒光光度法》，本方案具有：
前處理步驟簡單、回收率高、方法穩(wěn)定性好、凈化效果優(yōu)異等特點；
避免了免疫親和柱容易受環(huán)境影響而引起黃曲霉毒素回收率低和凈化效果不好的弊端，保證了實驗結(jié)果的重現(xiàn)性和準確性；
過柱方法簡單易操作，對操作人員要求不高，檢測成本相對較低，能被很多企事業(yè)單位采用。
以下為詳細解決方案，敬請參考！
花生油和糧谷中黃曲霉毒素的檢測——UPLC-MS/MS法
1、適用范圍
本方案適用于花生油、小米、高粱、糙米等樣品中黃曲霉毒素的檢測。本方案定量限是0.5 μg/kg。
2、提取
稱取2.0 g 樣品，加入8 mL 85%乙腈水，振蕩2 min，超聲10 min，6000 rpm離心2 min，收集上清液，待凈化。
3、凈化——ProElut AFT-3 12 mL（Cat#：65915）
將待凈化液加入柱中，收集2 mL流出液，在50 ℃水浴下減壓蒸干，用初始流動相定容到1 mL，過膜上機分析。
4、分析條件
4.1 UPLC 條件：
色譜柱：Leapsil C18，100 × 2.1 mm，2.7 μm (Cat#：86005)
流 速：0.3 mL/min
進樣量：5 μL
柱 溫：40 ℃
流動相：乙腈：0.1% 甲酸水
梯度
時間（min） | 0 | 6 | 7 | 15 |
乙腈（%） | 30 | 70 | 30 | 30 |
0.1% 甲酸水（%） | 70 | 30 | 70 | 70 |
4.2質(zhì)譜條件：
電離模式：ESI | 掃描方式：正離子掃描 |
檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測 | 電噴霧電壓：5500 V |
霧化氣壓力：50 psi | 輔助氣壓力：50 psi |
氣簾氣壓力：20 psi | 離子源溫度：500 ℃ |
定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量及去簇電壓見下表
藥物名稱 | 定性離子對 （m/z） (母離子/子離子) | 定量離子對 （m/z） (母離子/子離子) | 碰撞氣能量/eV | 去簇電壓/V |
AFB1 | 313.0/241.0 | 313.0/241.0 | 51 | 78 |
313.0/285.0 | 51 | |||
AFB2 | 315.0/259.0 | 315.0/259.0 | 40 | 77 |
315.0/287.0 | 40 | |||
AFG1 | 329.0/200.0 | 329.0/200.0 | 56 | 74 |
329.0/243.0 | 56 | |||
AFG2 | 331.0/189.0 | 331.0/189.0 | 60 | 61 |
331.0/313.0 | 60 | |||
AFM1 | 329.0/273.0 | 329.0/273.0 | 40 | 64 |
329.0/243.0 | 40 |
5、添加回收結(jié)果
糧谷及油類樣品中黃曲霉毒素檢測（添加水平10 μg/kg）的添加回收結(jié)果（%）
基質(zhì) | AFB1 | AFB2 | AFG1 | AFG2 | AFM1 |
花生油 | 94.0 | 102.4 | 106.6 | 93.2 | 96.2 |
糙米 | 96.0 | 99.2 | 87.2 | 108.4 | 87.6 |
高粱 | 94.4 | 93.8 | 86.4 | 95.0 | 92.6 |
小米 | 96.8 | 90.6 | 112.8 | 91.4 | 89.0 |
5種黃曲霉毒素10 μg/L MRM色譜圖
黃曲霉毒素B1 10 μg/L XIC色譜圖
黃曲霉毒素B2 10 μg/L XIC色譜圖
黃曲霉毒素G1 10 μg/L XIC色譜圖
黃曲霉毒素G2 10 μg/L XIC色譜圖
黃曲霉毒素M1 10 μg/L XIC色譜圖
花生油和糧谷中黃曲霉毒素檢測—UPLC-MS/MS法相關(guān)產(chǎn)品信息：
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
樣品前處理 | ||
65915 | ProElut AFT-3 | 12 mL, 20/pk |
244358 | 12管防交叉污染真空SPE萃取裝置 | 12位 |
4806 | 考克(控制流量) | 15/pk |
99011 | 真空/正壓兩用泵，無油 | 1/pk |
99013 | 抽濾瓶套裝 (包括硅橡膠管2米,2L抽濾瓶及橡膠塞) | 1/pk |
30039 | FitMax針頭式過濾器 Nylon | 13 mm,0.22 μm 100/pk |
30040 | FitMax針頭式過濾器 Nylon | 13 mm,0.45 μm 100/pk |
標準品 | ||
82O-S02017-1ML | 黃曲霉毒素B1(AFB1) [1162-65-8] | 2 μg/mL溶于乙腈, 1 mL |
82O-S02018-1ML | 黃曲霉毒素B2(AFB2) [7220-81-7] | 0.5 μg/mL溶于乙腈,1 mL |
82O-S02019-1ML | 黃曲霉毒素G1(AFG1) [1165-39-5] | 2 μg/mL溶于乙腈, 1 mL |
82O-S02020-1ML | 黃曲霉毒素G2(AFG2) [7241-98-7] | 0.5 μg/mL溶于乙腈,1 mL |
82O-S02030-1ML | 黃曲霉毒素M1(AFM1) [6795-23-9] | 0.5 μg/mL溶于乙腈,1 mL |
色譜柱及保護柱 | ||
86005 | Leapsil C18 2.7 μm UHPLC/HPLC 兼容反相色譜柱 | 100×2.1 mm，2.7 μm |
HPLC溶劑?緩沖鹽?離子對試劑 | ||
50101 | 乙腈 HPLC級 | 4 L |
50144 | 甲酸 HPLC級 | 50 mL |
通用色譜產(chǎn)品 | ||
52401B | 瓶架/藍色（現(xiàn)貨） | 50孔 |
52401A | 瓶架/白色（現(xiàn)貨） | 50孔 |
1034 | 樣品瓶（棕色/螺紋） | 2 mL, 100/pk |
1035 | 樣品瓶蓋/含墊（已經(jīng)組裝） | 100/pk |
H80465 | HPLC 進樣針 | 25 μL |
紅色產(chǎn)品貨號#30039、#30040、#1034、#1035*