動(dòng)物組織勻漿制備實(shí)驗(yàn)
- 公司名稱 伊萊博生物科技(上海)有限公司
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- 更新時(shí)間 2025/5/19 13:22:38
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動(dòng)物組織勻漿制備實(shí)驗(yàn)流程
1. ?組織取材與預(yù)處理?
處死動(dòng)物后迅速取材(如小鼠腦、肝臟等),用預(yù)冷PBS(0.01 M, pH 7.4)漂洗去除血液及雜質(zhì)
剔除脂肪、血管及結(jié)締組織,濾紙吸干水分,稱重(推薦組織量:0.1–1 g)
短期保存可置于-80℃凍存
2. ?勻漿介質(zhì)配制?
常用介質(zhì):預(yù)冷PBS或生理鹽水(組織重量:介質(zhì)體積=1:9)
特殊需求可添加蛋白酶抑制劑或EDTA
3. ?勻漿方法選擇?
?手工研磨?:玻璃勻漿器冰浴中上下研磨6–8分鐘
?機(jī)械勻漿?:組織搗碎機(jī)(10,000–15,000 rpm,間歇操作避免過熱)
?超聲勻漿?:適用于小樣本(需控制功率和時(shí)間)
4. ?離心與上清液?
勻漿液4℃下12,000 ×g離心15分鐘,取上清
必要時(shí)用紗布或?yàn)V膜過濾去除脂質(zhì)及碎片
5. ?質(zhì)量控制與保存?
檢測(cè)蛋白濃度或酶活性以評(píng)估勻漿效果
分裝后-80℃保存,避免反復(fù)凍融
注意事項(xiàng)
?全程低溫操作?:冰浴維持,防止蛋白降解
?避免過度剪切?:尤其對(duì)膜蛋白或細(xì)胞器研究需控制勻漿強(qiáng)度
?緩沖液適配性?:根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)調(diào)整pH及離子濃度